In Vitro - Experimentações efetuadas in vitro

Cultura Celular

A core facility da cultura celular contempla uma área total de XX metros2 e conta com um grupo de 2 Biologistas Especialistas e 1 Biologista técnico, dedicados ao estado da arte da biologia celular do câncer e em constante aperfeiçoamento de novas tecnologias.

 

O core possui um extenso painel de linhagens comerciais humanas neoplásicas e normais (168 linhagens), representantes de mais de 18 tipos tumorais. A coleção de linhagens celulares está sob os cuidados do banco de célula que conduz rigorosos testes de autenticação genética, detecção de micoplasmas e outros microorganismos em seu acervo. Além disso, contamos com uma coleção própria de cultura celulares primárias tumorais e normais depositadas neste repositório. A core facility oferece os serviços de manutenção de cultura de células, testes de micoplasma, microbiológicos e autenticidade molecular (STR) para a comunidade científica, além de participar de programas interlaboratórias para validação e qualificação dos testes oferecidos.

img-cultura-celular-iep-barretos

A infraestrutura disponível permite o delineamento de pesquisas básicas relacionadas aos mecanismos celular da carcinogênese. São realizados ensaios de formação de colônia, citotoxicidade, proliferação, migração, invasão, morte celular, imunohistoquímica e imunofluorescência usando cultivo 2D e 3D. Os Este conjunto de ensaios são utilizados para avaliar o potencial de citotoxidade de novos compostos sintéticos e de origem natural, bem como a associação entre diferentes terapias combinadas e suas correlações clínicas.

Sala de nível de biossegurança - NB2

Consiste em uma sala de cultura celular com registro ativo no Comissão Técnica Nacional de Biossegurança (CTNBIO) para realização de projetos de pesquisa envolvendo organismos geneticamente modificado (OGMs). A infraestrutura conta com cabines de biossegurança e incubadoras exclusivas para realizar experimentos envolvendo células geneticamente editadas a partir de técnicas como: siRNA, shRNA, vetores virais e CRISPR/cas9. Esses estudos incluem o isolamento, a cultura, a expansão e a caracterização, usuais para criar linhagens celulares modificadas e compreender o papel de genes na nos processos de transformação e manutenção de uma célula neoplásica e os mecanismos genéticos associados à resposta terapêutica de novos e atuais agentes com ação antineoplásicos. Os projetos de pesquisa com utilização de OGMs devem ser encaminhados ao comitê interno de biossegurança, e os usuários devem solicitar treinamento para utilização da sala.

High Content Screening

Para estudos in vitro e in vivo, o centro de pesquisa possui uma plataforma High Content Screening (HCS) que usa a microscopia de alta resolução para detecção de alterações morfológica das células, marcações fluorescentes de proteínas, mudanças nos fenótipos celulares e análises de organelas. Muito útil na triagem de novas drogas, a plataforma HCS permite a manipulação automatizada de líquidos, leitura de placas e lâminas, assim como o screening automatizado de compostos e arrays. Esta plataforma também contém ferramentas para análises e visualização de dados. Os ensaios realizados contemplam estudos de localização celular, citotoxicidade, internalização, cinética (time lapse), morte celular, genotoxicidade (micronúcleos) e estudos de arrays (siRNA, tissue microaarays). A utilização do equipamento é disponível aos usuários mediante solicitação de treinamento.

_MG_3047 - ajustado
img-microscopia-iep-barretos

Microscopia

O Laboratório de Microscopia é uma instalação com microscópios de luz de última geração com alta resolução; microscopia de fluorescência direta; microscopia confocal para estudos de co-localização e construção de imagens tridimensionais através da utilização de estações de processamento de imagem. A sala de microscopia possui um microscópio de microdissecção de captura a laser (MCL) que possibilita o isolamento e captura de células ou áreas teciduais para futuras experimentações. A utilização do laboratório é disponível aos usuários mediante solicitação de treinamento.

Citometria de Fluxo

O core de citometria de fluxo é composto por três equipamentos. Um deles é o BD Accuri™ C6, configurado com dois lasers (azul e vermelho), com capacidade de análise simultânea de até seis parâmetros (quatro cores de fluorescência, SSC e FSC). Essa configuração permite a realização de diferentes aplicações, incluindo contagem e quantificação celular, ensaios de apoptose, ciclo celular, proliferação e imunofenotipagem. Também está disponível um BD FACSMelody™, configurado com dois lasers: azul (488 nm) e verde-amarelo (561 nm), e seis canais de detecção, além de sistema de separação celular (cell sorting). Recentemente, foi incorporado à instituição um BD FACSymphony™ A5, por meio do Programa de Equipamentos Multiusuários (EMU) da FAPESP (Processo nº 2023/16688-3). Trata-se de um analisador de células por citometria de fluxo equipado com cinco lasers: violeta (405 nm), azul (488 nm), amarelo-esverdeado (561 nm), vermelho (637–640 nm) e ultravioleta (355 nm), permitindo a análise multiparamétrica de alta complexidade. Na configuração disponível na instituição, o equipamento permite a detecção simultânea de 29 parâmetros. Em conjunto, a plataforma possibilita a realização de diversas abordagens experimentais, incluindo contagem e quantificação absoluta de células, ensaios de apoptose, análise do ciclo celular e proliferação, imunofenotipagem multiparamétrica e separação de diferentes subpopulações celulares. O uso dos equipamentos está disponível aos usuários mediante solicitação e/ou treinamento, de acordo com as normas de utilização da plataforma.

cinometro
Voltar para página anterior

Parque de Equipamentos

FACS Melody / Citômetro / BD

Accurre / Citometria / BD

Varioskan / Leitora de Placas / Thermo Fisher

Luminex / Analizador / Millipore

Ultracentrífuga / Thermo Scientific

Supercentrífuga / Thermo Scientific

Gene Pulse / Eletroporador / BioRad

Fluoview / Microscópio confocal/ Olympus

Microscopia de Fluorescência / Nikon

Microscopia de microdissecção a laser / Olympus

Analisador em Tempo Real / XcellLigence RTCA/ Roche

Lupa com sistema de iluminação LED/ Olympus

Sala de Cultura estabelecida

InCell / Marca: GE / Moldeo: Analyzer 220

Citômetro BD FACSymphony A5